Lucas Vázquez de Ayllón était né vers 1475, à Tolède en Castille la Manche. Il était venu à Hispaniola en 1502 avec un emploi de juge. Vers 1514, il avait acheté un élevage de vaches à Hispaniola, appartenant à Gonzalo de Ocampo.

En 1520, il fut envoyé à Cuba pour tenter de faire la paix entre le gouverneur Diego Velázquez de Cuéllar et Hernán Cortés, et de dissuader le gouverneur de Cuba de lancer l'expédition de Panfilo de Narváez contre Cortés. Il n'y parvint pas, et se rendit au Mexique pour tenter de faire la paix entre Narváez et Cortés, sans plus de succès.

Après avoir participé à l'expédition en Caroline du Sud avec Francisco Gordillo, il se fit donner des titres par l'empereur Charles Quint, pour reprendre l'expédition sur les côtes américaines. Il partit en 1526, avec 600 hommes, et fonda dans la baie de Chesapeake (appelée alors Bahia de Santa Maria), la première colonie européenne en Amérique du Nord, appelée San Miguel de Guadalupe, à l'emplacement actuel de Jamestown.

L'expédition échoua, et des 600 hommes partis, seuls 150 revinrent à Hispaniola. Ayllón fut tué le 18 octobre 1526, lors d'une attaque des indigènes locaux.

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